Regolamento di esecuzione (UE) n. 503/2013 della Commissione del 3 aprile 2013 relativo alle domande di autorizzazione di alimenti e mangimi geneticamente modificati in applicazione del regolamento (CE) n. 1829/2003 del Parlamento europeo e del Consiglio e che modifica i regolamenti (CE) n. 641/2004 e n. 1981/2006 (Testo rilevante ai fini del SEE)
Testo vigente
ALLEGATO III
ALLEGATO III
VALIDAZIONE DEI METODI DI RILEVAZIONE, IDENTIFICAZIONE E QUANTIFICAZIONE DELL’EVENTO DI TRASFORMAZIONE E PRESCRIZIONI RELATIVE AI CAMPIONI DI CONTROLLO E AL MATERIALE DI RIFERIMENTO CERTIFICATO
1. INTRODUZIONE
1. Ai fini dell’applicazione dell’articolo 5, paragrafo 3, lettere i) e j), e dell’articolo 17, paragrafo 3, lettere i) e j), del regolamento (CE) n. 1829/2003, il presente allegato contiene disposizioni relative a:
a) le caratteristiche della performance dei metodi presentati;
b) le prescrizioni tecniche riguardanti il tipo di informazioni che il richiedente deve fornire per consentire la verifica del rispetto di tali prescrizioni;
c) campioni degli alimenti e dei mangimi e loro campioni di controllo;
d) materiale di riferimento certificato.
2. Il richiedente deve includere informazioni sul metodo in quanto tale e sulla sperimentazione del metodo che egli ha effettuato.
3. Il richiedente deve inoltre tenere conto delle linee guida e delle informazioni sulle procedure operative del procedimento di validazione messe a disposizione dal laboratorio di riferimento dell’UE (EURL) di cui all’articolo 32 del regolamento (CE) n. 1829/2003, assistito dalla rete europea dei laboratori per gli OGM1.
2. DEFINIZIONI
Ai fini del presente allegato si intende per:
a) «materiale di riferimento certificato» il materiale di riferimento di cui all’articolo 5, paragrafo 3, lettera j), e all’articolo 17, paragrafo 3, lettera j), del regolamento (CE) n. 1829/2003, che corrisponde ad ogni materiale o sostanza avente uno o più valori di proprietà certificati per la taratura o il controllo della qualità dei metodi utilizzati. Esso è accompagnato da un certificato che indica il valore della proprietà specificata, la relativa incertezza e una dichiarazione di tracciabilità metrologica;
b) «requisiti di performance del metodo» i criteri minimi di performance che il metodo deve soddisfare a conclusione dello studio di validazione effettuato dal laboratorio di riferimento dell’UE, conformemente alle disposizioni tecniche riconosciute a livello internazionale.
3. VALIDAZIONE DEI METODI
3.1. Informazioni sui metodi
A. I metodi devono indicare tutte le tappe metodologiche necessarie per analizzare il materiale dell’alimento o del mangime conformemente all’articolo 5, paragrafo 3, lettera i), e all’articolo 17, paragrafo 3, lettera i), del regolamento (CE) n. 1829/2003. Per un particolare materiale dell’alimento o del mangime occorre indicare anche i metodi di estrazione del DNA e la successiva quantificazione in un sistema di reazione a catena della polimerasi (PCR). In tal caso l’intero processo, dall’estrazione fino alla tecnica PCR, costituisce un metodo. Il richiedente deve fornire informazioni su tutto il metodo.
B. Il richiedente deve essere autorizzato a fare riferimento a protocolli convalidati, se disponibili e appropriati, per i moduli utilizzati nella procedura analitica, quale un protocollo di estrazione del DNA da una matrice specifica. In tal caso, il richiedente deve fornire dati sperimentali provenienti da una validazione interna nella quale il modulo è stato applicato con successo nel contesto della domanda di autorizzazione.
C. Il richiedente deve dimostrare che i metodi soddisfano le seguenti condizioni:
1. I metodi sono specifici all’evento di trasformazione (qui di seguito «specifici all’evento») e sono quindi funzionali soltanto con l’organismo geneticamente modificato o con il prodotto geneticamente modificato considerato e non funzionali se applicati ad altri eventi già autorizzati; in caso contrario non possono essere applicati per una rilevazione/identificazione/quantificazione inequivoca. Questa dimostrazione è fornita con una selezione di eventi di trasformazione transgenici non bersaglio autorizzati e di controparti convenzionali e deve includere anche eventi di trasformazione strettamente collegati.
2. I metodi sono applicabili ai campioni di alimenti o mangimi, ai campioni di controllo e al materiale di riferimento certificato.
3. Per sviluppare il metodo di rilevazione il richiedente deve prendere in considerazione i seguenti documenti:
a) Prodotti alimentari — Metodi di analisi per la rilevazione degli organismi geneticamente modificati e dei prodotti derivati — Prescrizioni generali e definizioni: ISO 24276
b) Prodotti alimentari — Metodi di analisi per la rilevazione degli organismi geneticamente modificati e dei prodotti derivati —Estrazione degli acidi nucleici: ISO 21571
c) Prodotti alimentari — Metodi di analisi per la rilevazione degli organismi geneticamente modificati e dei prodotti derivati — Metodi quantitativi basati sull’acido nucleico: ISO 21570
d) Prodotti alimentari — Metodi di analisi per la rilevazione degli organismi geneticamente modificati e dei prodotti — Metodi qualitativi basati sull’acido nucleico: progetto di norma europea ISO 21569
4. Il metodo deve tenere conto anche delle prescrizioni più dettagliate figuranti nei criteri comuni stabiliti dall’EURL e dall’ENGL relative ai requisiti minimi di performance dei metodi analitici per i test OGM. Tali criteri fanno parte delle linee guida fornite dall’EURL.
D. Ai fini dell’applicazione dell’articolo 5, paragrafo 3, lettera i), e dell’articolo 17, paragrafo 3, lettera i), del regolamento (CE) n. 1829/2003 il richiedente deve indicare i metodi di rilevazione quantitativa specifici all’evento del materiale geneticamente modificato. Il richiedente deve esaminare la validità e i limiti dei metodi di rilevazione nei vari tipi di alimenti e mangimi (le varie matrici) di cui è prevista l’immissione sul mercato.
E. Il richiedente deve fornire una descrizione completa e dettagliata del metodo, con informazioni precise sui seguenti punti:
1. Base scientifica: il richiedente deve esporre i principi di funzionamento del metodo, con riferimenti alle pubblicazioni scientifiche pertinenti.
2. Campo di applicazione del metodo: il richiedente deve indicare le matrici (ad esempio alimenti trasformati, materie prime), il tipo di campioni e il range percentuale cui il metodo può essere applicato.
3. Caratteristiche operative del metodo: deve essere specificata l’attrezzatura richiesta per l’applicazione del metodo, per quanto riguarda l’analisi in quanto tale e la preparazione del campione. Devono essere fornite informazioni su ogni aspetto specifico essenziale per l’applicazione del metodo.
4. Protocollo: il richiedente deve fornire un protocollo ottimizzato completo del metodo, contenente tutti i dati necessari per trasferire e applicare il metodo in modo indipendente in altri laboratori.
5. Un modello di previsione (o uno strumento analogo) necessario per interpretare i risultati e fare inferenze deve essere descritto dettagliatamente. Il richiedente deve fornire istruzioni per la corretta applicazione del modello.
6. Il richiedente deve indicare gli schemi di selezione da applicare per la produzione di alimenti e mangimi geneticamente modificati e la loro incidenza sull’interpretazione dei risultati.
3.2. Informazioni sulla sperimentazione del metodo effettuata dal richiedente
A. Il richiedente deve fornire tutti i dati disponibili e pertinenti sull’ottimizzazione e sulla sperimentazione del metodo. Questi dati e risultati devono essere presentati, ove possibile e opportuno, utilizzando i parametri di performance di cui al punto 3.1.C.4. Il richiedente deve fornire inoltre una sintesi della sperimentazione effettuata e dei principali risultati, nonché tutti i dati, compresi i valori erratici.
B. Le informazioni fornite dal richiedente devono dimostrare la robustezza del metodo dal punto di vista della trasferibilità tra laboratori. A questo scopo il richiedente deve indicare i risultati della sperimentazione del metodo da parte di almeno un laboratorio diverso da quello che ha sviluppato il metodo.
C. Il richiedente deve fornire le seguenti informazioni sullo sviluppo e sull’ottimizzazione del metodo:
1. le coppie di primer testate e, se del caso, la sonda utilizzata per il test (nel caso di un test PCR), con indicazione dei modi e dei motivi della scelta della coppia di primer proposta;
2. verifica della stabilità: da stabilire sulla base dei risultati della sperimentazione del metodo con differenti varietà di pianta;
3. specificità: da stabilire sulla base della sequenza completa degli inserti in un formato elettronico standard e delle coppie di base delle sequenze fiancheggianti ospiti, in modo da permettere all’EURL di valutare la specificità del metodo proposto effettuando una ricerca di omologia in una base dati molecolare;
4. precisione: la deviazione standard relativa di ripetibilità deve essere pari o inferiore al 25 % in relazione alla frazione di massa su tutto il range dinamico del metodo.
D. Oltre alle informazioni di cui ai punti A, B e C, il richiedente deve fornire le seguenti informazioni riguardanti la sperimentazione:
1. laboratori partecipanti, data dell’analisi e descrizione del disegno sperimentale, con dati sul numero di cicli, campioni, replicazioni ecc.;
2. descrizione dei campioni di laboratorio (dimensione, qualità, data di campionamento ecc.), controlli positivi e negativi e materiali di riferimento certificati, plasmidi e simili utilizzati;
3. descrizione degli approcci utilizzati per analizzare i risultati del test e i valori erratici;
4. particolarità osservate durante la prova;
5. riferimenti alla letteratura pertinente o alle disposizioni tecniche seguite per la prova.
3.3. Campioni degli alimenti e dei mangimi e loro campioni di controllo
Ai fini dell’applicazione dell’articolo 5, paragrafo 3, lettera j), e dell’articolo 17, paragrafo 3, lettera j), del regolamento (CE) n. 1829/2003, il richiedente deve fornire, oltre alle informazioni di cui ai punti 1, 2 e 3 del presente allegato, campioni degli alimenti e dei mangimi e i loro campioni di controllo, il cui tipo e la cui quantità sono precisati dall’EURL per ciascuna domanda d’autorizzazione. Le informazioni che accompagnano i campioni di controllo devono in particolare riguardare la selezione della pianta utilizzata per la produzione dei campioni di controllo e la zigosità degli inserti. Il richiedente può utilizzare la stessa materia prima sia per la produzione del materiale di riferimento certificato, sia per la produzione dei campioni di controllo.
4. MATERIALE DI RIFERIMENTO CERTIFICATO
Il materiale di riferimento certificato deve essere prodotto secondo la Guida ISO 34 (General requirements for the competence of reference material producers) da un produttore accreditato secondo tale guida. Il richiedente deve fornire informazioni sul luogo in cui il materiale di riferimento certificato è accessibile e informazioni indicanti che il materiale di riferimento certificato sarà mantenuto a disposizione per tutto il periodo di validità dell’autorizzazione. Per la verifica e per l’attribuzione dei valori deve essere utilizzato un metodo opportunamente validato (cfr. ISO/IEC 17025: General requirements for the competence of testing and calibration laboratories). Le incertezze devono essere stimate secondo la ISO Guide to the Expression of Uncertainty in Measurement (GUM). Le caratteristiche principali di queste disposizioni tecniche internazionali sono indicate qui di seguito.
1. Contenitori di materiale di riferimento geneticamente modificato:
a) i contenitori di materiale di riferimento geneticamente modificato (bottiglie, fiale, ampolle ecc.) devono essere chiusi ermeticamente e contenere una quantità di materiale almeno pari a quella indicata;
b) la commutabilità del materiale di riferimento geneticamente modificato deve essere garantita;
c) l’imballaggio deve essere adatto allo scopo;
d) l’etichettatura deve essere di buona presentazione e qualità.
2. Prova dell’omogeneità:
a) i campioni devono avere l’appropriata omogeneità;
b) deve essere esaminata l’omogeneità dei contenitori;
c) la stima dell’incertezza complessiva del materiale di riferimento deve tenere conto dell’eventuale eterogeneità dei contenitori, anche in assenza di una variazione statisticamente significativa tra i contenitori. In tal caso, l’incertezza complessiva deve tenere conto della variazione del metodo o della variazione effettiva calcolata tra i contenitori (se quest’ultima è superiore).
3. Prova della stabilità:
a) i campioni devono avere un’appropriata stabilità;
b) la stabilità deve essere dimostrata positivamente mediante un’appropriata estrapolazione statistica per la durata di conservazione del materiale di riferimento geneticamente modificato e situarsi nei limiti dell’incertezza indicata; la stima dell’incertezza del materiale di riferimento tiene conto dell’incertezza relativa a questa dimostrazione. I valori attribuiti sono validi solo per un tempo limitato e devono essere oggetto di un monitoraggio della stabilità.
4. Caratterizzazione dei lotti:
1. I metodi impiegati per la verifica e per la certificazione devono:
a) essere applicati in condizioni metrologicamente valide;
b) essere stati debitamente validati sul piano tecnico prima dell’utilizzo;
c) presentare una precisione e un’esattezza compatibili con l’incertezza bersaglio.
2. Ogni serie di misurazioni deve:
a) essere riconducibile ai riferimenti dichiarati;
b) essere accompagnata, se possibile, da una dichiarazione d’incertezza.
3. I laboratori partecipanti devono:
a) possedere la competenza richiesta per l’esecuzione dei compiti;
b) poter assicurare la tracciabilità in rapporto ai riferimenti dichiarati richiesti,
c) poter stimare l’incertezza delle proprie misure;
d) disporre di un sistema sufficiente e appropriato di garanzia della qualità.
5. Conservazione finale:
1. Per evitare ogni deterioramento dopo la loro produzione, i campioni devono essere conservati, prima dell’inizio delle misurazioni, nelle condizioni di conservazione finale del materiale di riferimento certificato geneticamente modificato.
2. In alternativa, i campioni devono essere trasportati da porta a porta e mantenuti costantemente in condizioni di conservazione che siano state dimostrate senza influenza sui valori attribuiti.
6. Rilascio di un certificato relativo al materiale di riferimento certificato È rilasciato un certificato, accompagnato da un rapporto di certificazione, contenente tutte le informazioni pertinenti e necessarie per l’utente. Il certificato e il rapporto devono essere messi a disposizione al momento della distribuzione del materiale di riferimento certificato geneticamente modificato. Le informazioni che accompagnano il materiale di riferimento certificato devono in particolare riguardare la selezione della pianta utilizzata per la produzione del materiale di riferimento certificato e la zigosità degli inserti. Il valore certificato del contenuto di OGM deve essere espresso in frazione di massa e, se il dato è disponibile, in numero di copie per equivalente del genoma aploide. I valori certificati (come la quantità di materiale geneticamente modificato espresso in frazione di massa) devono essere tracciabili in rapporto ai riferimenti dichiarati ed essere accompagnati da una dichiarazione d’incertezza ampliata valida per tutta la durata di conservazione del materiale di riferimento certificato geneticamente modificato.